心肌梗塞、脑血管血栓形成、深静脉血栓形成、脑栓塞和肺栓塞等血栓性疾病在中国有很高的发病率,也是致死的重要原因。血小板活化是血栓形成的重要环节,检测血小板的活化状态可辅助诊断和监控血栓性疾病,对判断血栓前状态意义也非常重大。
静止状态的血小板内分布着多种颗粒,如a颗粒、溶酶体颗粒等。这些颗粒表面存在着一些特定蛋白,如a颗粒表面有CD62p抗原,溶酶体颗粒表面有CD63抗原。血小板活化时,由于颗粒膜蛋白与血小板膜蛋白相互融合,使颗粒膜蛋白翻转到血小板膜表面。因此,可通过检测这些颗粒膜蛋白来判断血小板的活化状态。
EDTA抗凝采血,取后段血。因前段血中可能有组织液存在,造成人为血小板活化。
在血小板膜表面稳定表达的抗原有CD41/CD61(GPIIb/IIIa)和CD42a, CD42b等,这些抗原均可作为血小板的标志。但因中国存在着一部分血小板无力症患者,AG真人 AG平台其血小板表面缺乏CD41/CD61(GPIIb/IIIa)。因此,一般使用CD42b来鉴别血小板。
因一般情况下,CD62p和CD63的表达率均较低,需用PE等荧光较强的荧光素标记检测。
1)取试管A(阴性对照)和试管B(测定管),均加入5ml抗凝全血和200ml PBS
血小板在体外随着时间的延长会自发活化,所以由采血到检测一般要在3小时内完成。
固定法可避免血小板在体外因时间或操作造成的人为活化,固定后的血小板可在5天内检测。
而固定法的步骤较为繁琐,耗费时间,且在制备PRP时需离心,容易带来人为活化。所以很多实验室还是倾向于全血法。但是如果采血后不能立即检测(3小时内),则需用固定法。
选定血小板过去常用的方法是FS(C)/SS(C)设门,根据细胞的大小与颗粒度来确定血小板。AG真人 AG平台然而血小板的大小不一,有些血小板较大,容易与红细胞相混淆,尤其当活化时,血小板与白细胞发生粘附,在FS(C)/SS(C)图上进入白细胞群,使得一部分血小板丢失,因此应用该法对血小板进行选定不够准确。
目前公认的方法是用血小板特异性标志来选定血小板,因无论血小板大小,无论其是否活化,均稳定表达CD41/CD61(GPIIb/IIIa)和CD42a等,因此可以非常精确地区分血小板。
还记得你在读研时,所在学校的补助是多少吗~?读博的也可以说说呀。我的好少,有点想哭。
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悬浮细胞复苏后培养2.3天会出现小黑点,在倒置显微镜第四挡可见细菌在活动。采用两次离心,然后加平时双倍量的抗生素,效果不佳。实验用的东西都重新高压灭菌了,培养液也重新过滤了,个人操作也更加注意了,但仍然在复苏后出现细菌,苦恼!!!